Kromosom 11q-deletion i myeloide maligniteter

Kromosomale deletioner er tilbagevendende abnormiteter i leukæmi, hvilket indebærer tab af tumorsuppressorgener som en vigtig mekanisme i leukemogenese. Deletion af de lange arme af kromosom 5 og 7 forudsiger desuden en meget dårlig prognose ved akut myeloid leukæmi (AML) og myelodysplastisk syndrom (MDS)1,2. For nylig har man i forbindelse med myeloid malignitet karakteriseret deletioner, herunder deletion 9q i AML3 og deletion 20q i myeloproliferativ lidelse4. Deletion 11q er en sjælden cytogenetisk abnormitet i myeloid dis- ordener, med en rapporteret prævalens på 0,7 % i de novo og sekundær AML og MDS i en undersøgelse.5 Mens den prognostiske betydning af del(11q) er usikker, viste en tidligere rapport om deletion 11q23, at 15/16 AML- og 5/12 MDS-patienter døde med en samlet medianoverlevelse på 14,1 måneder.6 Vi foretog en molekylærcytogenetisk karakterisering af del(11q)-afvigelse baseret på arkivmateriale hos AML- og MDS-patienter diagnosticeret på vores center. Fluorescens in situ hybridisering (FISH) og komparativ genomisk hybridisering (CGH) procedurer blev udført i overensstemmelse med tidligere offentliggjorte protokoller.7

En gennemgang af patientjournaler afslørede ni tilfælde af del(11q) påvist blandt 819 tilfælde (1,1%) af AML og MDS diagnosticeret i de sidste 10 år (Tabel 1). Deletionen fandtes både som en eneste abnormitet (n = 6) og i forbindelse med andre ændringer (n = 3), herunder t(8;21) i tilfælde 2. Konventionel cytogenetisk analyse viste terminal deletion i henholdsvis seks tilfælde og interstitiel deletion i tre tilfælde (figur 1a). På grundlag af morfologiske og CGH-resultater (udført i tilfælde 4, 6-9) involverede deletionen proximale regioner af kromosombånd 11q23.

Tabel 1 En oversigt over karyotype, interfas FISH-resultater og klinisk resultat hos ni patienter med deletion 11q
Figur 1

(a) Konventionel cytogenetik og CGH-karakterisering af det slettede segment på kromosom 11q. Den sorte linje angiver deletionen på cytogenetisk niveau hos ni patienter, mens den røde linje angiver CGH-resultaterne hos fem patienter (tilfælde 4, 6-9). I tilfælde 7 repræsenterer fraværet af 11q abnormitet på CGH højst sandsynligt en afbalanceret omlægning mellem kromosom 6 og 11. (b) Interfas FISH med MLL-sonde, der viser deletion af et MLL-allel i tre celler og bevarelse af to MLL-alleler i en celle. (c) Interfase-FISH med MLL-sonde i tilfælde 7, der viser MLL-split-signal (adskilte røde og grønne signaler) i tre celler, hvilket tyder på omlægning af MLL-genet. En celle viser to normale MLL-alleler (sammensmeltede røde/grønne signaler). (d) Southern Blot-analyse med PS/4-sonde: P-DNA, placenta-DNA (negativ kontrol); RS4:11, cellelinje, der har t(4;11) (positiv kontrol). Tilfælde 7 viste rearrangementbånd i BamHI-, EcoRI- og SacI-digester, mens tilfælde 6 var negativt for MLL-rearrangement. (e) Delvis karyotype afledt af kromosomer 6 og 11 i tilfælde 7. G-banding med trypsin/Giemsa. (f) Delvis karyotype med afledte kromosomer 11 og 15 i tilfælde 3. G-banding med trypsin/Giemsa. (g) hel kromosomtegning i tilfælde 7, der viser tilføjelse af kromosom 11-materiale til 6q27. Mens CGH-resultatet tydede på en afbalanceret omlægning, blev tilstedeværelsen af kromosom 6-materiale ikke påvist på kromosom 11q, sandsynligvis på grund af manglende følsomhed af kromosommalingssonder til påvisning af meget lille subtelomerisk kromosomalt materiale. (h) Intakte telomerer på kromosom 6 og 11 som påvist ved FISH ved hjælp af et PNA-sondersæt til humane telomerer.

Da MLL-genet (mixed lineage leukemia) er placeret ved brudpunktet 11q23, udførte vi interfas FISH på seks tilfælde (1-3, 7-9), hvor der var celler til rådighed i Carnoy’s fixativ, ved hjælp af en MLL dobbeltfarvet break-apart rearrangement-sonde (Vysis, Downers Grove, IL, USA). Den bestod af et centromerisk fragment på 350 kb og et telomerisk fragment på 190 kb, der var mærket med forskellige fluorochromer. Fire tilfælde viste en overvægt af et enkelt fusionssignal (figur 1b), hvilket var i overensstemmelse med bevarelse af den ene allel og deletion af den anden. Tilfælde 7 viste et MLL-splitningssignal i overensstemmelse med genomlægning (figur 1c), hvilket blev bekræftet med Southern Blot-hybridisering ved hjælp af PS/4-sonde på BamHI-, EcoRI- og SacI-digester (figur 1d). Gennemgang af karyotypen viste en subtil forlængelse af kromosom 6q (Figur 1e). Yderligere metafase-FISH ved hjælp af de relevante helkromosommalingssonder (Vysis) viste tilføjelse af kromosom 11-materiale til 6q27 (figur 1g), hvilket blev bekræftet ved anvendelse af de respektive malingssonder med omvendt fluorochrommærkning (data ikke vist). Ubalancerede ændringer som f.eks. tilføjelse af kromosom 11qter-materiale til telomeren af kromosom 6 blev udelukket ved tilstedeværelsen af intakte telomerer på begge kromosomer som påvist ved FISH (figur 1h) ved hjælp af et PNA-telomersondersæt (Dako, København, Danmark). Mens kromosomal rearrangement i dette tilfælde kan have resulteret i fusion mellem MLL og et kandidatgen, sandsynligvis AF6, baseret på brudpunktets placering på 6q27, var der desværre ingen prøve til rådighed til at afkode denne mulighed. Endelig var der en predomi

nance af to fusionssignaler i tilfælde 2, hvilket indikerer tilstedeværelsen af to MLL-alleler. Efterfølgende reanalyse af karyotypen viste tilstedeværelsen af 11q-materiale på kromosom 15’s lange arm, således at del(11q) og add(15q) bør revideres som t(11;15)(q21;q26) (figur 1f). Der var imidlertid ingen metafase til rådighed i Carnoy’s fixativ til bekræftelse ved kromosommalingsforsøg. Tilstedeværelsen af tre ud af fire signaler i dette tilfælde indikerede tilstedeværelsen af ekstra MLL-alleler, sandsynligvis som følge af duplikation af det afledte kromosom 15 i et lille antal celler.

Vores undersøgelse viste, at i overensstemmelse med en tidligere FISH-undersøgelse8 , involverede del(11q) i myeloide maligniteter ensartet båndet 11q23. Det er fristende at spekulere, baseret på vores data, at monoallel MLL-deletion kan spille en rolle i initiering eller progression af myeloide maligniteter med del(11q)-abnormalitet, især i lyset af de hæmatologiske abnormiteter, der vises i MLL +/- mus9 , som indikerer haploinsufficiens. Endnu vigtigere er det, at vi viste, at del(11q) er heterogen på molekylært niveau og kan være et fingerpeg om kryptiske omlægninger, der involverer kromosom 11q eller MLL-genet. Det følger derfor, at tilstedeværelsen af del(11q) i myeloide maligniteter kræver yderligere karakterisering ved hjælp af molekylærcytogenetiske teknikker, især for at påvise kryptiske MLL-translokationer, der har prognostisk betydning.1

Skriv et svar

Din e-mailadresse vil ikke blive publiceret.