La delezione del cromosoma 11q nelle neoplasie mieloidi

Le delezioni cromosomiche sono anomalie ricorrenti nella leucemia, che implicano la perdita dei geni soppressori del tumore come un meccanismo significativo nella leucemogenesi. La delezione dei bracci lunghi dei cromosomi 5 e 7, inoltre, predice una prognosi molto cattiva nella leucemia mieloide acuta (AML) e nella sindrome mielodisplastica (MDS).1,2 Più recentemente, le delezioni caratterizzate nei tumori maligni mieloidi includono la delezione 9q nella AML,3 e la delezione 20q nel disturbo mieloproliferativo.4 La delezione 11q è un’anomalia citogenetica rara nei disordini mieloidi, con una prevalenza riportata dello 0,7% nella AML de novo e secondaria e nella SMD in uno studio.5 Mentre il significato prognostico di del (11q) è incerto, un rapporto precedente sulla delezione 11q23 ha mostrato che 15/16 AML e 5/12 MDS pazienti sono morti con una sopravvivenza globale mediana di 14.1 mesi.6 Abbiamo eseguito la caratterizzazione citogenetica molecolare del (11q) anomalia basato su materiale di archivio in AML e SMD pazienti diagnosticati presso il nostro centro. Le procedure di ibridazione in situ a fluorescenza (FISH) e di ibridazione genomica comparativa (CGH) sono state eseguite secondo i protocolli precedentemente pubblicati.7

Un esame delle cartelle cliniche ha rivelato nove casi di del(11q) rilevati tra 819 casi (1,1%) di AML e SMD diagnosticati negli ultimi 10 anni (Tabella 1). La delezione esisteva sia come unica anomalia (n = 6) che in associazione con altri cambiamenti (n = 3), tra cui t(8;21) nel caso 2. L’analisi citogenetica convenzionale ha mostrato la delezione terminale in sei casi e la delezione interstiziale in tre casi, rispettivamente (Figura 1a). Sulla base dei risultati morfologici e CGH (eseguiti nei casi 4, 6-9), la delezione ha coinvolto regioni prossimali della banda cromosomica 11q23.

Tabella 1 Un riassunto del cariotipo, dei risultati FISH interfasici e dell’esito clinico in nove pazienti con delezione 11q
Figura 1

(a) Citogenetica convenzionale e caratterizzazione CGH del segmento cancellato al cromosoma 11q. La linea nera denota la delezione a livello citogenetico in nove pazienti, mentre la linea rossa denota i risultati CGH in cinque pazienti (casi 4, 6-9). Nel caso 7, l’assenza di anomalia 11q su CGH rappresenta molto probabilmente un riarrangiamento bilanciato tra i cromosomi 6 e 11. (b) FISH interfase con sonda MLL, che mostra la delezione di un allele MLL in tre cellule e la conservazione di due alleli MLL in una cellula. (c) FISH interfase con sonda MLL nel caso 7, che mostra il segnale di divisione MLL (segnali rossi e verdi separati) in tre cellule, indicando il riarrangiamento del gene MLL. Una cellula mostra due alleli MLL normali (segnali rosso/verde fusi). (d) Analisi Southern blot utilizzando la sonda PS/4: P-DNA, DNA placentare (controllo negativo); RS4:11, linea cellulare portatrice di t(4;11) (controllo positivo). Il caso 7 ha mostrato bande di riarrangiamento nei digest BamHI, EcoRI e SacI, mentre il caso 6 era negativo per il riarrangiamento MLL. (e) Cromosomi derivati parziali del cariotipo 6 e 11 nel caso 7. G-banding con tripsina/Giemsa. (f) Cariotipo parziale che mostra i cromosomi derivati 11 e 15 nel caso 3. G-banding con tripsina/Giemsa. (g) Pittura cromosomica completa nel caso 7, che mostra l’aggiunta di materiale del cromosoma 11 al 6q27. Mentre il risultato CGH suggeriva un riarrangiamento bilanciato, la presenza di materiale del cromosoma 6 non è stata rilevata sul cromosoma 11q, molto probabilmente legato alla mancanza di sensibilità delle sonde di pittura cromosomica per rilevare materiale cromosomico subtelomerico minuto. (h) Telomeri intatti sui cromosomi 6 e 11 come rilevato da FISH utilizzando un set di sonde PNA per telomeri umani.

Poiché il gene della leucemia di lignaggio misto (MLL) si trova al breakpoint 11q23, abbiamo eseguito la FISH interfasica su sei casi (1-3, 7-9) in cui erano disponibili cellule nel fissativo di Carnoy, utilizzando una sonda di riarrangiamento a doppia colorazione MLL break-apart (Vysis, Downers Grove, IL, USA). Consisteva in un frammento centromerico di 350 kb e un frammento telomerico di 190 kb etichettato con diversi fluorocromi. Quattro casi hanno mostrato una predominanza di un singolo segnale di fusione (Figura 1b), coerente con la conservazione di un allele e la cancellazione dell’altro. Il caso 7 ha mostrato un segnale di divisione MLL in linea con il riarrangiamento del gene (Figura 1c), che è stato confermato con l’ibridazione Southern blot usando la sonda PS/4 su digest BamHI, EcoRI e SacI (Figura 1d). L’esame del cariotipo ha mostrato un sottile allungamento del cromosoma 6q (Figura 1e). Ulteriori metafase FISH utilizzando le relative sonde di pittura del cromosoma intero (Vysis) ha mostrato l’aggiunta di materiale cromosoma 11 a 6q27 (Figura 1g), ed è stato confermato utilizzando le rispettive sonde di pittura con etichetta fluorocromo invertito (dati non mostrati). Cambiamenti sbilanciati come l’aggiunta di materiale del cromosoma 11qter al telomero del cromosoma 6 è stato escluso dalla presenza di telomeri intatti su entrambi i cromosomi come dimostrato da FISH (Figura 1h) utilizzando un set di sonde telomeriche PNA (Dako, Copenhagen, Danimarca). Mentre il riarrangiamento cromosomico in questo caso potrebbe aver portato alla fusione tra MLL e un gene candidato molto probabilmente AF6 basato sulla posizione del breakpoint a 6q27, purtroppo non era disponibile alcun campione per decifrare questa possibilità. Infine, c’era una predominanza

di due segnali di fusione nel caso 2, indicando la presenza di due alleli MLL. La successiva ri-analisi del cariotipo ha mostrato la presenza di materiale 11q sul braccio lungo del cromosoma 15, in modo che del(11q) e add(15q) dovrebbe essere rivisto come t(11;15)(q21;q26) (Figura 1f). Nessuna metafase, tuttavia, era disponibile nel fissativo di Carnoy per la conferma mediante esperimenti di pittura cromosomica. La presenza di tre dei quattro segnali in questo caso ha indicato l’esistenza di alleli MLL extra, molto probabilmente come risultato della duplicazione del cromosoma derivato 15 in un piccolo numero di cellule.

Il nostro studio ha dimostrato che, in accordo con un precedente studio FISH,8 del(11q) nei tumori maligni mieloidi ha coinvolto uniformemente la banda 11q23. È allettante ipotizzare, sulla base dei nostri dati, che la delezione monoallelica MLL può svolgere un ruolo nell’inizio o nella progressione dei tumori maligni mieloidi con del (11q) anomalia, soprattutto alla luce delle anomalie ematologiche visualizzate in MLL + / – topi 9 indicativo di aploinsufficienza. Ancora più importante, abbiamo dimostrato che del(11q) è eterogeneo a livello molecolare e può essere un indicatore per riarrangiamenti criptici che coinvolgono il cromosoma 11q o il gene MLL. Ne consegue quindi che la presenza di del(11q) nei tumori maligni mieloidi richiede un’ulteriore caratterizzazione mediante tecniche di citogenetica molecolare, in particolare per rilevare traslocazioni MLL criptiche che sono di significato prognostico.1

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