Deleção do cromossomo 11q em tumores malignos mielóides

Deleções cromossômicas são anormalidades recorrentes na leucemia, implicando na perda de genes supressores do tumor como um mecanismo significativo na leucemogênese. A deleção dos braços longos dos cromossomos 5 e 7, além disso, prevê um prognóstico muito ruim na leucemia mielóide aguda (LMA) e na síndrome mielodisplásica (MDS).1,2 Mais recentemente, as deleções caracterizadas nas malignidades mielóides incluem deleção 9q na LMA,3 e deleção 20q na doença mieloproliferativa.4 A deleção 11q é uma rara anormalidade citogenética nas ordens diseloides mielóide, com uma prevalência relatada de 0,7% em LMA e MDS de novo e secundário em um estudo.5 Embora a significância prognóstica da del(11q) seja incerta, um relato anterior sobre deleção 11q23 mostrou que 15/16 pacientes com LMA e 5/12 MDS morreram com sobrevida total mediana de 14,1 meses.6 Realizamos caracterização citogenética molecular da anormalidade del(11q) baseada em material de arquivo em pacientes com LMA e MDS diagnosticados em nosso centro. Os procedimentos de hibridação in situ da fluorescência (FISH) e de hibridação genômica comparativa (CGH) foram realizados de acordo com protocolos previamente publicados.7

Uma revisão dos registros de pacientes revelou nove casos de del(11q) detectados entre 819 casos (1,1%) de LMA e MDS diagnosticados nos últimos 10 anos (Tabela 1). A deleção existiu tanto como uma única anormalidade (n = 6) quanto em associação com outras alterações (n = 3), incluindo t(8;21) no caso 2. A análise citogenética convencional mostrou deleção terminal em seis casos e deleção intersticial em três casos, respectivamente (Figura 1a). Com base nos resultados morfológicos e de CGH (realizados nos casos 4, 6-9), a deleção envolveu regiões proximais da banda cromossômica 11q23.

Tabela 1 Um resumo do cariótipo, resultados de FISH interfase e resultado clínico em nove pacientes com deleção 11q
Figure 1

(a) Citogenética convencional e caracterização CGH do segmento deletado no cromossomo 11q. A linha preta denota deleção ao nível da citogenética em nove pacientes, enquanto a linha vermelha denota CGH resulta em cinco pacientes (casos 4, 6-9). No caso 7, a ausência da anormalidade 11q na HCC representa, muito provavelmente, um rearranjo equilibrado entre os cromossomos 6 e 11. (b) FISH interfásico com sonda MLL, mostrando deleção de um alelo MLL em três células e preservação de dois alelos MLL em uma célula. c) FISH interfásico com sonda MLL no caso 7, mostrando o sinal de divisão MLL (sinais vermelhos e verdes separados) em três células, indicando o rearranjo do gene MLL. Uma célula mostra dois alelos MLL normais (sinais vermelhos/verdes fundidos). d) Análise de blot sul usando a sonda PS/4: P-DNA, DNA placentário (controle negativo); RS4:11, linha celular que abriga o t(4;11) (controle positivo). O caso 7 mostrou faixas de rearranjo nos digestores BamHI, EcoRI e SacI, enquanto o caso 6 foi negativo para rearranjo MLL. (e) Cromossomos derivados do cariótipo parcial 6 e 11, no caso 7. Banda G com trypsin/Giemsa. (f) Cariótipo parcial mostrando os cromossomas derivados 11 e 15 no caso 3. Banda G com tripsina/Giemsa. (g) Pintura integral do cromossoma no caso 7, mostrando adição de material do cromossoma 11 a 6q27. Enquanto o resultado do CGH sugeria um rearranjo equilibrado, a presença do material do cromossoma 6 não foi detectada no cromossoma 11q, muito provavelmente relacionada à falta de sensibilidade das sondas de pintura cromossômica para detectar material cromossômico subtelomérico minúsculo. (h) Telômeros intactos nos cromossomos 6 e 11, como detectados por FISH usando um conjunto de sondas de PNA para telômeros humanos.

Como o gene da leucemia de linhagem mista (MLL) está localizado no ponto de quebra 11q23, realizamos FISH interfase em seis casos (1-3, 7-9) nos quais células do fixador de Carnoy estavam disponíveis, usando uma sonda MLL de rearranjo de dupla cor (Vysis, Downers Grove, IL, EUA). Consistia de um fragmento centromérico de 350 kb e um fragmento telomérico de 190 kb rotulado com diferentes fluorocromos. Quatro casos mostraram predominância de um único sinal de fusão (Figura 1b), consistente com a preservação de um alelo e deleção do outro. O caso 7 mostrou sinal de divisão MLL de acordo com o rearranjo genético (Figura 1c), que foi confirmado com a hibridização Southern blot usando a sonda PS/4 nos digestores BamHI, EcoRI e SacI (Figura 1d). A revisão do cariótipo mostrou sutil alongamento do cromossomo 6q (Figura 1e). Outras metáforas FISH usando as sondas de pintura cromossômica inteira (Vysis) relevantes mostraram adição de material do cromossomo 11 a 6q27 (Figura 1g), e foi confirmada empregando as respectivas sondas de pintura com rótulo de fluorocromo invertido (dados não mostrados). Alterações desequilibradas como a adição de material do cromossoma 11qter ao telômero do cromossoma 6 foi descartada pela presença de telômeros intactos em ambos os cromossomos, como demonstrado por FISH (Figura 1h) usando um conjunto de sondas de PNA telômero (Dako, Copenhagen, Dinamarca). Embora o rearranjo cromossómico neste caso possa ter resultado na fusão entre o MLL e um gene candidato muito provavelmente AF6 com base na localização do ponto de quebra a 6q27, infelizmente não havia nenhuma amostra disponível para decifrar esta possibilidade. Finalmente, houve um predomi

nança de dois sinais de fusão no caso 2, indicando a presença de dois alelos MLL. A posterior reanálise do cariótipo mostrou a presença de material 11q no braço longo do cromossomo 15, de modo que del(11q) e add(15q) devem ser revisados como t(11;15)(q21;q26) (Figura 1f). Nenhuma metáfase, no entanto, estava disponível no fixador do Carnoy para confirmação por experimentos de pintura cromossômica. A presença de três de quatro sinais neste caso indicou a existência de alelos extra MLL, muito provavelmente como resultado da duplicação do cromossomo 15 derivado em pequenos números de células.

Nosso estudo mostrou que, de acordo com um estudo prévio de FISH8 del(11q) em malignidades mielóides envolveu uniformemente a banda 11q23. É tentador especular, com base em nossos dados, que a deleção MLL monoalélica pode desempenhar um papel no início ou progressão de malignidades mielóides com anormalidade del(11q), especialmente à luz das anormalidades hematológicas exibidas na MLL +/- ratos9 indicativos de haploinsuficiência. Mais importante, mostramos que del(11q) é heterogêneo em nível molecular e pode ser um ponteiro para rearranjos crípticos envolvendo o cromossomo 11q ou o gene MLL. Portanto, a presença de del(11q) nas malignidades mielóideóides requer uma maior caracterização por técnicas citogenéticas moleculares, em particular para detectar translocações crípticas do MLL que são de importância prognóstica.1

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