Deleția cromozomului 11q în tumorile mieloide maligne

Delețiile cromozomiale sunt anomalii recurente în leucemie, implicând pierderea genelor supresoare tumorale ca un mecanism semnificativ în leucemogeneză. De altfel, deleția brațelor lungi ale cromozomilor 5 și 7 prezice un prognostic foarte prost în leucemia mieloidă acută (AML) și în sindromul mielodisplastic (MDS).1,2 Mai recent, delețiile caracterizate în tumorile maligne mieloide includ deleția 9q în AML,3 și deleția 20q în tulburarea mieloproliferativă.4 Deleția 11q este o anomalie citogenetică rară în dis- ordinele mieloide, cu o prevalență raportată de 0,7% în AML și MDS de novo și secundare într-un studiu.5 Deși semnificația prognostică a del(11q) este incertă, un raport anterior privind deleția 11q23 a arătat că 15/16 pacienți cu LMA și 5/12 pacienți cu SMD au decedat, cu o supraviețuire generală mediană de 14,1 luni.6 Noi am efectuat caracterizarea citogenetică moleculară a anomaliei del(11q) pe baza materialului de arhivă la pacienții cu LMA și SMD diagnosticați în centrul nostru. Procedurile de hibridizare in situ prin fluorescență (FISH) și de hibridizare genomică comparativă (CGH) au fost efectuate în conformitate cu protocoalele publicate anterior.7

O analiză a arhivelor pacienților a evidențiat nouă cazuri de del(11q) detectate printre 819 cazuri (1,1%) de LMA și SMD diagnosticate în ultimii 10 ani (Tabelul 1). Deleția a existat atât ca o singură anomalie (n = 6), cât și în asociere cu alte modificări (n = 3), inclusiv t(8;21) în cazul 2. Analiza citogenetică convențională a arătat deleție terminală în șase cazuri și, respectiv, deleție interstițială în trei cazuri (figura 1a). Pe baza rezultatelor morfologice și CGH (efectuate în cazurile 4, 6-9), deleția a implicat regiuni proximale ale benzii cromozomiale 11q23.

Tabelul 1 Rezumat al cariotipului, al rezultatelor FISH interfazice și al evoluției clinice la nouă pacienți cu deleție 11q
Figura 1

(a) Caracterizarea citogenetică convențională și CGH a segmentului deletat la nivelul cromozomului 11q. Linia neagră denotă deleția la nivel citogenetic la nouă pacienți, în timp ce linia roșie denotă rezultatele CGH la cinci pacienți (cazurile 4, 6-9). În cazul 7, absența anomaliei 11q la CGH reprezintă, cel mai probabil, o rearanjare echilibrată între cromozomii 6 și 11. (b) FISH interfazic cu sonda MLL, care arată deleția unei alele MLL în trei celule și conservarea a două alele MLL într-o celulă. (c) FISH interfazic cu sonda MLL în cazul 7, care arată un semnal de divizare MLL (semnale roșii și verzi separate) în trei celule, indicând rearanjarea genei MLL. O celulă prezintă două alele MLL normale (semnale roșu/verde fuzionate). (d) Analiza Southern blot cu sonda PS/4: P-DNA, ADN placentar (control negativ); RS4:11, linie celulară care adăpostește t(4;11) (control pozitiv). Cazul 7 a prezentat benzi de rearanjare în digestările BamHI, EcoRI și SacI, în timp ce cazul 6 a fost negativ pentru rearanjarea MLL. (e) Cariotip parțial al cromozomilor derivați 6 și 11 în cazul 7. Bandaj G cu tripsină/Giemsa. (f) Cariotip parțial care prezintă cromozomii derivați 11 și 15 în cazul 3. Bandaj G cu tripsină/Giemsa. (g) Pictura cromozomului întreg în cazul 7, care arată adăugarea materialului cromozomului 11 la 6q27. În timp ce rezultatul CGH a sugerat o rearanjare echilibrată, prezența materialului cromozomial 6 nu a fost detectată pe cromozomul 11q, cel mai probabil din cauza lipsei de sensibilitate a sondelor de pictură cromozomială pentru detectarea materialului cromozomial subtelomeric minuscul. (h) Telomeri intacți pe cromozomii 6 și 11, detectați prin FISH cu ajutorul unui set de sonde PNA pentru telomeri umani.

Potrivit faptului că gena leucemiei de linie mixtă (MLL) este localizată la punctul de ruptură 11q23, am efectuat FISH interfazic pe șase cazuri (1-3, 7-9) în care erau disponibile celule în fixatorul Carnoy, folosind o sondă de rearanjament MLL cu dublă culoare de ruptură și separare (Vysis, Downers Grove, IL, SUA). Aceasta a constat dintr-un fragment centromeric de 350 kb și un fragment telomeric de 190 kb marcat cu diferiți fluorocromi. Patru cazuri au prezentat o predominanță a unui singur semnal de fuziune (figura 1b), în concordanță cu păstrarea unei alele și ștergerea celeilalte. Cazul 7 a prezentat un semnal de divizare MLL în concordanță cu rearanjarea genei (figura 1c), care a fost confirmată prin hibridizare Southern blot utilizând sonda PS/4 pe digestările BamHI, EcoRI și SacI (figura 1d). Revizuirea cariotipului a arătat o alungire subtilă a cromozomului 6q (figura 1e). O FISH metafazică suplimentară utilizând sondele de pictură a cromozomului întreg relevante (Vysis) a arătat adăugarea de material al cromozomului 11 la 6q27 (figura 1g) și a fost confirmată prin utilizarea sondelor de pictură respective cu marcaj fluorocromic inversat (datele nu sunt prezentate). Modificările dezechilibrate, cum ar fi adăugarea de material al cromozomului 11qter la telomerul cromozomului 6, au fost excluse prin prezența telomerilor intacți pe ambii cromozomi, așa cum a fost demonstrat prin FISH (figura 1h) folosind un set de sonde PNA pentru telomeri (Dako, Copenhaga, Danemarca). Deși rearanjarea cromozomială în acest caz ar fi putut avea ca rezultat o fuziune între MLL și o genă candidată, cel mai probabil AF6, pe baza localizării punctului de ruptură la 6q27, din păcate nu a fost disponibilă nicio probă pentru a descifra această posibilitate. În cele din urmă, a existat o predomi

nanță a două semnale de fuziune în cazul 2, indicând prezența a două alele MLL. Reanaliza ulterioară a cariotipului a arătat prezența materialului 11q pe brațul lung al cromozomului 15, astfel încât del(11q) și add(15q) ar trebui revizuite ca t(11;15)(q21;q26) (Figura 1f). Cu toate acestea, nu a fost disponibilă nicio metafază în fixatorul Carnoy pentru confirmare prin experimente de pictură cromozomială. Prezența a trei din patru semnale în acest caz a indicat existența unor alele MLL suplimentare, cel mai probabil ca urmare a duplicării cromozomului 15 derivat în număr mic de celule.

Studiul nostru a arătat că, în concordanță cu un studiu FISH anterior,8 del(11q) în tumorile maligne mieloide a implicat în mod uniform banda 11q23. Este tentant să speculăm, pe baza datelor noastre, că deleția MLL monoalelică poate juca un rol în inițierea sau progresia malignităților mieloide cu anomalie del(11q), mai ales în lumina anomaliilor hematologice afișate la șoarecii MLL +/-9 care indică haploinsuficiență. Mai important, am arătat că del(11q) este eterogenă la nivel molecular și poate fi un indicator pentru rearanjamente criptice care implică cromozomul 11q sau gena MLL. Rezultă, prin urmare, că prezența del(11q) în afecțiunile maligne mieloide necesită o caracterizare suplimentară prin tehnici de citogenetică moleculară, în special pentru a detecta translocațiile criptice MLL care au semnificație prognostică.1

.

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată.